每個做細胞實驗的人，不管去哪“浪"，心里都會有個牽掛：我的細胞，過兩天要傳代！

大部分組織細胞離體培養(yǎng)時，會以貼壁的形式生長（除了取自血、脾或骨髓的細胞）;*培養(yǎng)基中的血清，含有許多帶陽性電荷的促細胞附著因子（層黏連蛋白 Laminine、纖維鏈接蛋白 Fibronectin 等胞外基質(zhì)），能幫助細胞附著于帶陰性電荷的底物上（玻璃或塑料培養(yǎng)容器），并形成鍵結(jié)、貼壁伸展。

▲ 陽性電荷的促細胞附著因子，能幫助細胞附著于帶陰性電荷的底物上

所以當(dāng)細胞長滿需要分盤的時后，就要想辦法讓細胞和培養(yǎng)底物說 再見！也就是所謂的細胞消化（Cell Detachment）。

常見細胞消化法有以下三種：

1、物理機械法

直接用液體吹打或用刮刀，施予外力讓細胞與培養(yǎng)底物分離；適用于貼壁性弱的細胞傳代，但相較于其它消化方法，這種外力無法量化控制，細胞分散效果差，且可能會造成大量細胞破損，使內(nèi)容物釋放到培養(yǎng)基，進而影響細胞傳代狀態(tài)。

▲細胞刮勺

2、離子螯合法

細胞膜表面蛋白大多需要鈣、鎂離子來維持與胞外基質(zhì)的穩(wěn)定鍵結(jié)，當(dāng)然也包含各種黏附蛋白（例：整合素、鈣黏著蛋白、橋粒等），螯合劑會在不破壞細胞膜表面蛋白的狀況下，抽離這些離子，使黏附蛋白失活而減少細胞-細胞間及細胞-底物間的連接作用，讓細胞較容易在施予外力時，脫離培養(yǎng)底物并促進細胞分散。

0.02% EDTA是細胞傳代較為常用的離子螯合劑，在37℃作用效果較為佳（消化較敏感的細胞可在4℃作用），適用于消化一般貼壁性細胞或細胞表面標(biāo)記實驗細胞。

但EDTA無法用血清終止其反應(yīng)，所以在消化細胞后必須用緩沖鹽溶液（如：PBS）清洗離心，以免影響后續(xù)細胞貼盤效果。

▲ EDTA（黑）能螯合二價離子（紅）

3、酶消化法

用蛋白水解酶消化連接細胞及培養(yǎng)底物的蛋白質(zhì)，適用于消化貼壁性稍強的細胞。

細胞消化小技巧

不一定要一次把所有細胞都要消化下來！

▲ 消化不下來的細胞（黃）請視情況決定是否再消化一次。

結(jié)語

細胞消化 ，是一個看似很簡單，但是有很多技術(shù)含量的步驟。消化好壞、是否污染、有無受傷，都在這短短的五六分鐘里決定。

當(dāng)我們已經(jīng)可以順利操作細胞培養(yǎng)實驗，接下來要思考的，就是如何讓細胞長得更健康、更均一、做出來的實驗才會更好。

祝各位的細胞都顆顆透亮、粒粒分明、活力旺盛！