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          原位裂解細胞的CAT分析法

          發(fā)布時間: 2021-12-15  點擊次數(shù): 1188次

          材料與儀器

          轉(zhuǎn)染細胞
          Triton裂解液
          培養(yǎng)皿 培養(yǎng)箱

          步驟

          1.  60 mm 培養(yǎng)皿中轉(zhuǎn)染了CAT表達質(zhì)粒的細胞,用2 ml PBS洗1次。每培養(yǎng)皿加入2 ml 低滲緩沖液,在室溫下溫育2~5 min。

          2.  吸去低滲緩沖液,加入400 μl Triton裂解液。用橡膠刮子將細胞刮離培養(yǎng)血,用1 000 μl 移液器將裂解物移入1.5  ml 微量離心管中。

          3.  微量離心1 min 除去細胞核,不可溶性蛋白。將上清轉(zhuǎn)入一個干凈的微量離心管中, 進行CAT活性分析。

           


          同實驗其他方法

          CAT活性的層析分析法

          1.  100 mm 培養(yǎng)皿中的轉(zhuǎn)染了CAT表達質(zhì)粒的貼壁細胞,用PBS洗兩次,每次5 ml每培養(yǎng)皿加入1 ml TEN溶液。將細胞置于冰浴5 min。   2.  用橡膠

          CAT活性的相-抽提分析法

          一、來源于哺乳動物細胞 1.  按“CAT活性的層析分析法"中的步驟1~5的凍融法,制備哺乳動物細胞提取物。如果用胰蛋白酶消化或制細胞方法來收集細胞,則將原位裂解法的步驟1至4用以下的步驟2

          人生長激素的放射免疫分析法

          1.  取轉(zhuǎn)染了hGH表達質(zhì)粒的哺乳動物細胞的培養(yǎng)液100~500 μl。 2.  加100 μl 培養(yǎng)液或標準品至12 mm×75 mm 圓底試管中。加入100 μl 125I-

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