轉(zhuǎn)染是實驗過程中常用的技術(shù)操作，通俗來說，常見的轉(zhuǎn)染即為把某種功能性質(zhì)粒轉(zhuǎn)到細胞中去，通過轉(zhuǎn)染試劑的作用在經(jīng)過一段時間后，收集細胞通過WB、qpcr等來檢測質(zhì)粒是否正常發(fā)揮作用來達到我們實驗的某種需求；不同的質(zhì)粒通常有不同的轉(zhuǎn)染試劑和不同的方法，如PEI轉(zhuǎn)染、lipo2000轉(zhuǎn)染等。

Lipofectmine ™ RNAiMAX轉(zhuǎn)染主要供siRNA和Stealth ™ RNAi 雙鏈體轉(zhuǎn)染使用，具有轉(zhuǎn)染效率高、對細胞毒性小等優(yōu)點，分為正向轉(zhuǎn)染及反向轉(zhuǎn)染兩種方式。siRNA轉(zhuǎn)染比較常見，因此本文分享主要針對siRNA反向轉(zhuǎn)染。

轉(zhuǎn)染前準備

1.準備試劑包括：Opti-MEM培養(yǎng)基、Lipofectamine™ RNAiMAX試劑、siRNA、不加雙抗的10%FBS培養(yǎng)基、胰酶、PBS緩沖液等常見處理細胞的試劑。

2.反向轉(zhuǎn)染要求細胞密度≥90%。

轉(zhuǎn)染中

1.按正常處理細胞的流程將長滿的細胞經(jīng)過胰酶消化離心后去上清，注意此處需要加無雙抗的10%FBS培養(yǎng)基1ml進行細胞重懸，重懸完后根據(jù)細胞生長速度鋪細胞，保證轉(zhuǎn)染完后24h細胞密度達到30-50%。

2.轉(zhuǎn)染復合物制備：根據(jù)說明書制備轉(zhuǎn)染復合物，添加量如下表所示。

根據(jù)轉(zhuǎn)染的實際情況將Opti-MEM培養(yǎng)基、Lipofectamine™ RNAiMAX試劑、siRNA依次加入到一個無菌Ep管中，按照先加Opti-MEM培養(yǎng)基、再加siRNA最后加Lipofectamine™ RNAiMAX試劑的順序，輕輕混勻室溫孵育20min。

3.20min后依次將轉(zhuǎn)染復合物加入細胞培養(yǎng)皿種，輕輕混勻，放入細胞培養(yǎng)箱內(nèi)。

轉(zhuǎn)染后

1.轉(zhuǎn)染后24h內(nèi)最好不要挪動細胞，也不要拿出在顯微鏡下觀察，期間也無需進行細胞換液。

2.轉(zhuǎn)染后48h后，可拿出細胞觀察細胞形態(tài)有無變圓，肉眼觀察轉(zhuǎn)染效率，對于生長較慢的細胞，其表型可能會在72h內(nèi)逐漸顯現(xiàn)。根據(jù)細胞生長情況可進行換液，注意此時需要換含雙抗的血清培養(yǎng)基。

3.在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)，若細胞變圓較為厲害，應在轉(zhuǎn)染后4天左右收細胞進行轉(zhuǎn)染效率測定，時間太久細胞太少的話檢測難度較大。

4.此種轉(zhuǎn)染方式最長可維持5-7天的基因敲除效果。

注意事項

1. Lipofectamine™ RNAiMAX試劑在冰箱4℃保存，切記不能冷凍。

2. Lipofectamine™ RNAiMAX試劑不宜在室溫放置過久，因此在制備轉(zhuǎn)染復合物前從冰箱拿出，加完后應立即放回4℃再進行后續(xù)操作。

3.轉(zhuǎn)染復合物制備完成后室溫孵育時間不得超過20min，因此建議將細胞鋪好板后十字混勻，暫放于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)，再進行轉(zhuǎn)染復合物的制備。

4.siRNA應于-80℃保存。

5.在處理細胞重懸時一定要使用無雙抗的10%FBS培養(yǎng)基，避免細胞死亡，如果在鋪板后還要進行細胞傳代也沒有影響，直接用上述混懸液傳代即可。

6. Lipofectamine ™ RNAiMAX轉(zhuǎn)染的兩種方式差別不是很大，主要區(qū)別在于正向轉(zhuǎn)染需要提前一天進行細胞鋪板，第二天直接加入轉(zhuǎn)染復合物，同時還需要在轉(zhuǎn)染后4-6h進行細胞換液。反向轉(zhuǎn)染速度比正向轉(zhuǎn)染更快，操作較為簡潔，因此更建議使用反向轉(zhuǎn)染。

以上就是本期的內(nèi)容，更多資訊，歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

安培生物致力成為推動生命科學進步值得信賴的合作者

深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、先進的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)。總部設(shè)在廣東，服務面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司，旨在為生命科學的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務。本公司建立了涵蓋分子生物學、細胞生物學、免疫學、信號傳導和神經(jīng)科學等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應線，在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品，安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務。

可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術(shù)支持，深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴，安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應商，公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨，配合優(yōu)秀的銷售隊伍以及專業(yè)的技術(shù)支持，隨時為客戶提供服務。