3D細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)膠

一、產(chǎn)品優(yōu)勢

1、基質(zhì)膠為植物源：

A.無人畜共患病的病原菌或毒素污染

B.氨基酸序列100%人源化

C.成本低且易規(guī)模化大量生產(chǎn)

D.3D培養(yǎng)結(jié)束后基質(zhì)膠可以融化

E.4度運輸

F.產(chǎn)品有效期2年

2、可用作醫(yī)療生物原料：

A.高安全、低過敏

B.高活性、高純度

C.最是適合人體研究

3、符合人體癌藥篩檢：

A.低成本且穩(wěn)定

B.3D癌組織培養(yǎng)系統(tǒng)

C.可用于精準(zhǔn)人體癌藥篩檢

4、滿足生物原料需求：

A.自產(chǎn)關(guān)鍵原料

B.低成本

C.降低批次差異

D.人源化原料更精準(zhǔn)

二、應(yīng)用

•三維細(xì)胞球體培養(yǎng)試驗

•適合用于三維細(xì)胞藥物篩檢平臺

三、樣本類型

•腫瘤細(xì)胞系

四、試劑盒組分

五、使用步驟：

A、試劑制備

A 基質(zhì)膠：將A 基質(zhì)膠溶于 37℃水浴槽回溫 10分鐘， 確認(rèn)*融解.

C 緩沖溶液(1X)制備： 使用前將 10X C 緩沖溶液用冰的無細(xì)胞培養(yǎng)液(例如：無血清 DMEM、 opt-MEM) 制備成 1X C 緩沖溶液。(不要用 PBS 稀釋 C 緩沖液) .

D 緩沖溶液(1X)制備: 使用前用冷的 1x PBS 稀釋 10X D 緩沖溶液至 1X D 緩沖溶液.

Biozellen®3D 細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)膠的制備

全部步驟需要在無菌環(huán)境內(nèi)操作，操作步驟如下：

1. 將 24孔培養(yǎng)板放置于冰上預(yù)冷。

2. 細(xì)胞計數(shù)后取 2×105~2×107 細(xì)胞與 0.5 毫升 37℃ 培養(yǎng)基均勻混合，并與 0.5毫升 37℃ A 膠按照

1:1 等比例均勻混合，最終細(xì)胞密度105~107cells/mL。

注：請選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)溶液與條件進行試驗，貼壁細(xì)胞應(yīng)在~80% 匯合度下培養(yǎng)。

3.取 20-40 微升步驟 2 含細(xì)胞的混合 A 膠溶液滴于 步驟 1 預(yù)冷的培養(yǎng)板上， 膠體將于 5 分鐘內(nèi)成膠。

注: 測試膠體是否成膠，可用微量吸管尖溫和的觸碰膠體表面進行確認(rèn)。

4.待膠體成膠后，添加 1 毫升冰的1X C 緩沖溶液，并蓋過步驟 3 的膠溶液，固定 15 分鐘。

5.待 15分鐘固定后，小心的吸取 C 緩沖溶液并置換為適合此細(xì)胞生長之培養(yǎng)基溶液。

6將含有細(xì)胞的膠于 37°C 二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)進行7~14天的培養(yǎng)，并觀察細(xì)胞球體的形成，按正常培養(yǎng)基

更換頻率進行更換操作。

C、溶膠與收集細(xì)胞球體準(zhǔn)備程序

小心的將培養(yǎng)基吸取移除，并用 1X PBS 進行清洗。

小心的將 1X PBS 吸取移除，并添加 1 毫升冰的 D 緩沖溶液，蓋過膠滴于室溫反應(yīng) 5 分鐘。

溫和的用 1毫升移液管吸取，直到膠滴*溶解。

將含有細(xì)胞球體的溶液吸入 1.5 毫升離心管，用1000 rpm的轉(zhuǎn)速離心 10分鐘，移除上清液體并收集細(xì)胞

球體做分析。

D、收集單顆細(xì)胞準(zhǔn)備程序

在分離單細(xì)胞前，先按上述溶膠與收集細(xì)胞球體準(zhǔn)備程序進行操作

1. 添加 trypsin-EDTA并與收集的細(xì)胞球體于 37°C 混合反應(yīng)。

2. 用 1毫升移液管混合，直到細(xì)胞體*分解。

3. 待細(xì)胞球體*分解，加入 3 倍體積的 1X PBS，并用 1000 轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)速進行離心 10分鐘，并移除上清

液體收集沉淀的單細(xì)胞做分析。

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